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體外哺乳動物細胞基因突變試驗儀簡單好用體外哺乳動物細胞基因突變試驗儀簡單好用

一、 儀器介紹

實驗目的：

本試驗用于檢測受試物對體外培養(yǎng)的哺乳動物細胞的基因突變作用,包括堿基對突變、移碼突變和缺失等,從而評價受試物引起突變的可能性

實驗概述：

本試驗屬正向突變試驗,可檢出堿基置換型致突變物和移碼型致突變物。在加入和不加入代謝活化系統(tǒng)的條件下,使細胞暴露于受試物一定時間,然后將細胞傳代培養(yǎng)。胸苷激酶水平正常的細胞對（trifluorothymidine,TFT）等敏感,因而在培養(yǎng)液中不能生長分裂,突變細胞則不敏感,在含有的選擇性培養(yǎng)液中能繼續(xù)分裂并形成集落。相似的,核糖基酶(HPRT)正常的細胞對 6-硫代（6-thioguanine,6-TG）敏感,突變的細胞則不敏感,在含有 6-硫代的選擇性培養(yǎng)液中可生長形成集落?；谕蛔兗鋽?shù),計算突變頻率以評價受試物的致突變性。

應用范圍

應用于科研、農(nóng)業(yè)、衛(wèi)生、教育、霧霾狀態(tài)可吸入顆粒染毒效果研究等各個領(lǐng)域

符合標準：

GB/T 15670.20-2017《農(nóng)藥登記毒理學試驗方法第20部分:體外哺乳動物細胞基因突變試驗》

二、試驗流程

1）細胞培養(yǎng):

選擇合適細胞系（如L5178Y、CHO），常規(guī)傳代培養(yǎng)

2）受試物處理:

暴露于不同濃度受試物（需設(shè)陰性/陽性對照）

3）表達期:

預留足夠時間（通常7-10天）使突變表型顯現(xiàn)。

4.）突變體篩選:

TK試驗:使用（TFT）篩選TK突變體。

HPRT試驗:使用6-硫代（6-TG）選HPRT突變體。

5）克隆形成分析:

計數(shù)突變集落，計算突變頻率（突變集落數(shù)/存活細胞數(shù)）

6）數(shù)據(jù)統(tǒng)計:

與對照組比較，判斷突變率是否顯著增加。

三、注意事項

1）細胞活力控制:受試物濃度需保證細胞存活率（通常>50%）

2）代謝活化系統(tǒng):需加入S9混合物(模擬體內(nèi)代謝，（如Aroclor 1254誘導的大鼠肝S9）。

3）假陽性/陰性:避免pH、滲透壓等非特異性因素干擾。

4）合規(guī)性:   遵循國際指南（如OECD 490、ICH S2R1）。

計算：